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α淀粉酶(α-AMS)酶聯(lián)免疫分析（ELISA） 試劑盒使用說明書 本試劑僅供研究使用 目的：本試劑盒用于測定微生物樣本中α淀粉 酶(α-AMS)的活性。 實(shí)驗(yàn)原理： 本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中α淀粉酶(α-AMS)水平。用純化的α淀粉酶(α -AMS)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入α淀粉酶(α-AMS)， 再與 HRP 標(biāo)記的α淀粉酶(α-AMS)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底 洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最 終的黃色。顏色的深淺和樣品中的α淀粉酶(α-AMS)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下 測定吸光度（OD 值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中α淀粉酶(α-AMS)活性濃度。 試劑盒組成： 試劑盒組成 48 孔配置 96 孔配置 保存 說明書 1 份 1 份 封板膜 2 片（48） 2 片（96） 密封袋 1 個(gè) 1 個(gè) 酶標(biāo)包被板 1×48 1×96 2-8℃保存 標(biāo)準(zhǔn)品：320IU/L 0.5ml×1 瓶 0.5ml×1 瓶 2-8℃保存 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1 瓶 1.5ml×1 瓶 2-8℃保存 酶標(biāo)試劑 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存 樣品稀釋液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存 顯色劑 A 液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存 顯色劑 B 液 3 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 2-8℃保存 終止液 3ml×1 瓶 6ml×1 瓶 2-8℃保存 濃縮洗滌液 （20ml×20 倍）×1 瓶 （20ml×30 倍）×1 瓶 2-8℃保存 注：標(biāo)準(zhǔn)品用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液依次稀釋為：160、80、40、20、10IU/L 標(biāo)本要求： 1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能2 馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融 2．不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。 操作步驟 1. 加樣：標(biāo)準(zhǔn)品設(shè)定 5 個(gè)濃度點(diǎn) 10 個(gè)孔，每個(gè)濃度設(shè)定平行孔，加入 50 微升不同濃度的 標(biāo)準(zhǔn)品，空白孔設(shè)定 1 個(gè)孔加入 50 微升蒸餾水（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其 余各步操作相同）、待測樣品孔，在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl， 然后再加待測樣品 10μl（樣品最終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡 量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。 2. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。 3. 配液：將 30（48T 的 20 倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30（48T 的 20 倍）倍稀釋后備用。 4. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此 重復(fù) 5 次，拍干。 5. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外。 6. 溫育：操作同 2。 7. 洗滌：操作同 4。 8. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色 15 分鐘. 9. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。 10. 測定：以空白孔調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應(yīng)在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。 注意事項(xiàng)： 1． 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未 用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。 2． 濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。 3． 各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間最好 控制在 5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。 4． 請(qǐng)每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本 OD 值 大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的 OD 值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計(jì) 算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。 5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6． 底物請(qǐng)避光保存。 7． 嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn). 8． 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。 9． 本試劑不同批號(hào)組分不得混用。3 計(jì)算：以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)， 在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的 OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋 倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計(jì)算出標(biāo) 準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值 代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋 倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。 （此圖僅供參考） 試劑盒性能： 1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù) R 值為 0.990 以上。 2.批內(nèi)與批間應(yīng)分別小于 9%和 11% 檢測范圍： 3IU/L - 180IU/L 保存條件及有效期： 1.試劑盒保存：2-8℃。 2.有效期：12 個(gè)月