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水凝膠形式的殺微生物制劑由于給藥方便、作用時間長,成為預(yù)防HIV傳播和感染的有效途徑。然而目前所報道的使用水凝膠用于HIV病毒暴露前預(yù)防的殺微生物制劑多負載單一的抗艾滋病藥物。為了避免產(chǎn)生病毒抗藥性,本課題借鑒“雞尾酒療法”的思路,研究制備了一種共負載親疏水性藥物的溫敏納米水凝膠。該凝膠以泊洛沙姆407為溫敏凝膠材料,以層狀雙氫氧化物(layered double hydroxides,LDH)為載體材料負載疏水性藥物尼非韋羅,親水性藥物茶黃素則分散在溫敏納米水凝膠的親水區(qū)。合成的LDH通過透射電鏡觀察其形態(tài),馬爾文粒度儀觀察其粒徑電位;LDH-泊洛沙姆407水凝膠通過冷法制備,以尼羅紅為疏水性藥物模型,通過紫外分光光度計檢測載藥凝膠的體外釋放,通過馬爾文流變儀測定溫敏凝膠的流變性能和凝膠化溫度;以新西蘭大白兔為動物模型,對凝膠的安全性進行了評價,通過ELISA酶聯(lián)免疫法檢測單次給藥后,陰道灌洗液中的IL-8和TNF-α水平,通過HE染色觀察陰道粘膜的病理特征,通過免疫組化檢測黏膜上皮細胞內(nèi)的IL-6和TNF-α水平;以新西蘭大白兔為實驗動物,研究了載藥溫敏凝膠的藥代動力學特征,通過高效液相色譜檢測茶黃素的血藥濃度-時間變化曲線以及局部藥物濃度,通過熒光分光光度計檢測尼羅紅的血藥濃度-時間變化曲線以及局部藥物濃度,通過電感耦合等離子質(zhì)譜檢測鎂離子和鋁離子的血漿藥物濃度-時間變化曲線;通過流式細胞儀檢測載藥溫敏凝膠對人樹突狀細胞表面受體CCR5的封閉效應(yīng)。結(jié)果表明成功合成了無機金屬離子載體材料LDH,透射電鏡顯示LDH納米粒子呈現(xiàn)均一的正六邊形,平均粒徑為60±1.85nm,Zeta電位約為32mV;流變學結(jié)果表明LDH-泊洛沙姆407水凝膠的凝膠化溫度為25℃,溫敏凝膠在進入人體后可迅速完成從溶膠到凝膠的轉(zhuǎn)變;體外釋放結(jié)果顯示,溫敏凝膠能夠控制藥物釋放長達10h而沒有嚴重的突釋現(xiàn)象;ELISA實驗結(jié)果表明單次給藥后,陰道灌洗液中的IL-8和TNF-α含量較低,病理組織切片結(jié)果表明,連續(xù)給藥5天后新西蘭大白兔陰道黏膜上皮結(jié)構(gòu)完好,沒有明顯的出血紅腫,免疫組化結(jié)果表明陰道粘膜上皮細胞內(nèi)IL-6和TNF-α水平較低,溫敏納米水凝膠對陰道粘膜的刺激性較小,生物相容性良好;體內(nèi)藥物釋放結(jié)果顯示,茶黃素和尼羅紅的血藥濃度在24小時內(nèi)緩慢上升且無明顯的突釋現(xiàn)象,表明LDH-泊洛沙姆407水凝膠能夠?qū)崿F(xiàn)良好的控釋放;局部藥物濃度實驗表明茶黃素和尼羅紅在陰道局部具有較高的藥物濃度,能夠更好地預(yù)防HIV病毒的入侵,滿足長期控釋陰道給藥系統(tǒng)的要求;流式結(jié)果表明載藥溫敏凝膠能夠釋放出尼非韋羅并與人樹突狀細胞表面受體CCR5結(jié)合,從而阻止HIV病毒入侵人體。由于具有良好的生物相容性、控制釋放能力以及在局部較高的藥物濃度,LDH-泊洛沙姆407溫敏納米水凝膠有望成為抗HIV病毒藥物的良好載體。 還原
溫敏水凝膠; 尼非韋羅; 茶黃素; 陰道給藥系統(tǒng); 控制釋放;
兔白細胞介素 8（IL-8）ELISA 試劑盒、兔腫瘤壞死因子-α（TNF-α）ELISA 試劑盒 武漢默沙克生物科技有限公司
