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摘要：目的:本文旨在研究分析HPV感染口咽鱗狀細(xì)胞癌后DNA整合情況,以及河南地區(qū)口咽鱗癌患者人群中HPV的感染情況,總結(jié)分析口咽鱗狀細(xì)胞癌患者的臨床病理特征,以期尋求一種準(zhǔn)確率高、使用方便、性價比好的口咽鱗癌HPV檢測方法,并進(jìn)一步了解HPV在口咽鱗癌中的致癌機(jī)制及基因整合機(jī)制。方法:選擇鄭州大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院病理科存檔滿足入組條件的口咽鱗癌手術(shù)或活檢標(biāo)本89例石蠟包埋蠟塊,分別用p16免疫組織化學(xué)法(p16 IHC),HPV E6/E7mRNA 3.0 assay法(branched DNA,bDNA),二代測序法(NGS)檢測組織中HPV感染情況。其中HPV基因整合情況由二代測序方法檢測。并收集89例患者的臨床病例資料,分析以上三種方法檢測的HPV陽性結(jié)果與其臨床病理參數(shù)的相關(guān)性及其臨床意義。實驗結(jié)果采用SPSS 24.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。結(jié)果:1、河南地區(qū)口咽部鱗狀細(xì)胞癌患者中HPV感染率在15%-20%之間。p16IHC、bDNA、NGS三種方法HPV陽性檢出率分別為:22.5%(20/89),16.9%(15/89),12.4%(11/89)。2、與患者臨床病理資料比較,三種方法與患者的性別、年齡、原發(fā)灶部位、腫瘤分化程度、腫瘤T分期等臨床參數(shù)均無明顯相關(guān)(P>0.05)。p16 IHC方法檢測的HPV結(jié)果在N分期淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組與非轉(zhuǎn)移組中HPV陽性率分別為40.0%(12/30),11.1%(2/18),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.049);在TNM分期Ⅰ-Ⅱ組與Ⅲ-Ⅳ組中分別為10.5%(2/19),41.5%(12/29),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.026)。而bDNA與NGS方法檢測結(jié)果與N分期、TNM分期無明顯相關(guān)(P>0.05)。3、以NGS為參照,p16 IHC與bDNA檢測方法的敏感性均為63.6%;特異性分別為83.3%、89.7%;陽性預(yù)測值分別為35.0%、48.7%;陰性預(yù)測值分別為94.2%、94.6%;Kappa值分別為0.348,0.462,p16 IHC和bDNA兩方法與NGS方法結(jié)果一致性一般。但p16 IHC與bDNA兩種方法之間的一致性較好,Kappa值為0.752。4、NGS檢測發(fā)現(xiàn)有HPV DNA整合標(biāo)本11例,其中7例為多條整合,4例為單條整合。共在14條人類染色體上發(fā)現(xiàn)整合HPV DNA 33條。在這些整合基因組中HPV16型14條、18型19條,其中1號染色體整合數(shù)目最多,達(dá)39.4%(13/33)。5、對NGS檢測單條整合組與多條整合組比較發(fā)現(xiàn),多條整合組標(biāo)本p16蛋白更易過表達(dá)(P=0.044)且bDNA檢測拷貝值更高(P=0.043)。結(jié)論:經(jīng)過三種不同實驗對同一批89例口咽鱗癌患者標(biāo)本進(jìn)行檢測與比較,三種檢測方式各有優(yōu)劣。1、NGS雖然可在DNA水平準(zhǔn)確檢測基因序列,但因其檢測成本高、技術(shù)難度大而不易在臨床推廣。p16 IHC雖然與bDNA在檢測敏感性、特異性、陰/陽性預(yù)測值方面結(jié)果類似,但在臨床實際工作中其操作步驟比bDNA更簡便、普及率更高,故推薦p16 IHC作為臨床上檢測HPV感染的方法。2、HPV DNA有最高的概率整合到1號染色體上,因此在1號染色體上可能存在與HPV DNA相關(guān)的特異性結(jié)合位點,但需進(jìn)一步研究證實。當(dāng)HPV DNA整合到多條染色體上后其宿主細(xì)胞p16蛋白表達(dá)及E6/E7 mRNA表達(dá)均會增加,這可能會是HPV致癌能力增強(qiáng)的原因之一。3、NGS作為新一代測序技術(shù),在檢測基因組序列、分析不同基因之間關(guān)系、基因多態(tài)性研究等方面有先天的優(yōu)勢。它將是未來進(jìn)一步探究HPV致癌機(jī)制以及尋找新一代治療方式的最佳選擇。

關(guān)鍵詞：口咽鱗狀細(xì)胞癌; 人乳頭瘤狀病毒; p16; 免疫組織化學(xué); 二代測序;

I 抗：抑癌基因p16單克隆抗體、II 抗：HRP標(biāo)記兔抗小鼠IgG   武漢默沙克生物科技有限