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摘要：[目的]1、對RVVC和VVC患者的致病假絲酵母菌進(jìn)行菌種鑒定,分析菌種分布情況;2、對致病假絲酵母菌進(jìn)行基因分型,分析菌株的基因型分布及與其來源的關(guān)系:3、對致病假絲酵母菌進(jìn)行3種抗真菌藥物(氟康唑、兩性霉素B、伊曲康唑)的體外藥物敏感性實(shí)驗(yàn),比較菌株對3種抗真菌藥物的敏感性差異,分析不同菌株的藥物敏感性與其來源及基因型間的關(guān)系;4、測定致病假絲酵母菌的分泌型天冬氨酸蛋白酶、細(xì)胞外磷脂酶活性及其Sap-2、PLB-1的表達(dá)量,分析致病假絲酵母菌的侵襲力相關(guān)因子與其來源、基因型及藥敏情況之間的關(guān)系。[方法]1、所有致病菌株均取自我院婦產(chǎn)科門診外陰陰道假絲酵母菌病患者,其中RWC致病菌株95株,VVC致病菌株223株,均分離純化后先用科瑪嘉念珠菌顯色培養(yǎng)基、安圖念珠菌顯色培養(yǎng)基初步鑒定菌種,最后用生物梅里埃VITEK 2系統(tǒng)鑒定明確菌種;2、提取樣本的基因組DNA,根據(jù)樣本255rDNA基因編碼區(qū)可轉(zhuǎn)座I型內(nèi)含子的有無及大小,通過PCR技術(shù)對270株致病白假絲酵母菌進(jìn)行基因分型;3、采用美國臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化研究院(Clinical And Laboratory Standards Institute,CLSI)制定的M27-A3方案推薦的微量稀釋法進(jìn)行體外藥敏實(shí)驗(yàn),根據(jù)CLSI提供的折點(diǎn)值結(jié)合實(shí)驗(yàn)得出的最小抑菌濃度判斷藥物敏感性;4、采用牛奶培養(yǎng)基及蛋黃培養(yǎng)基分別測定樣本的分泌型天冬氨酸蛋白酶及細(xì)胞外磷脂酶活性;5、ELISA法測定樣本的Sap-2及PLB-1的表達(dá)量。6、運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。[結(jié)果]1、共收集到外陰陰道假絲酵母菌病致病菌318株,包括非妊娠期VVC致病菌196株,其中白假絲酵母菌186株(94.9%),非妊娠期RVVC致病菌75株,其中白假絲酵母菌69株(92.0%),妊娠期VVC致病菌27株,全部(100%)鑒定為白假絲酵母菌,妊娠期RVVC致病菌20株,其中白假絲酵母菌19株(95%);提示妊娠與非妊娠VVC及RVVC致病菌株均以白假絲酵母菌為主,在全部標(biāo)本中一共檢出17株非白假絲酵母菌,其中以光滑假絲酵母菌為主(52.9%)。2、270株白假絲酵母菌分為3種基因型,其中A型237株(87.8%)為不含內(nèi)含子菌株,B型23株(8.5%)和C型10株(3.7%)為含內(nèi)含子菌株;不含內(nèi)含子組(A型)和含內(nèi)含子組(B型+C型)兩組基因型菌株在妊娠與非妊娠WC及RVVC患者致病菌株中的構(gòu)成比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P>0.05,A基因型菌株最為多見。3、非妊娠RWC組及VVC組致病白假絲酵母菌的藥物敏感性均為氟康唑最高,伊曲康唑最差;非妊娠VVC患者不同基因型菌株中,不含內(nèi)含子組(A型)和含內(nèi)含子組(B型+C型)兩組的24h氟康唑、兩性霉素B及伊曲康唑的敏感率均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,P>0.05;48h氟康唑敏感率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,P>0.05;不含內(nèi)含子組(A型)菌種48h兩性霉素B敏感率高于含內(nèi)含子組,而伊曲康唑敏感率低于含內(nèi)含子組,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,P<0.05。4、非妊娠VVC患者不同基因型菌株3種藥物的體外藥敏實(shí)驗(yàn)MIC值均有顯著性差異,P<0.05,不含內(nèi)含子組(A型)菌株的氟康唑和伊曲康唑24h及48h MIC值均高于含內(nèi)含子組(B型+C型)菌株,而兩性霉素B 24h及48h MIC值低于含內(nèi)含子組菌株。5、非妊娠RVVC菌株中,含內(nèi)含子組致病白假絲酵母菌的細(xì)胞外磷脂酶陽性率及酶活性高于不含內(nèi)含子組菌株,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,P<0.05。6、非妊娠RVVC致病白假絲酵母菌中伊曲康唑敏感株的天冬氨酸蛋白酶活性比非敏感株強(qiáng),有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,P<0.05。7、RVVC患者致病白假絲酵母菌的Sap-2及PLB-1的表達(dá)量均明顯高于VVC患者致病白假絲酵母菌,其中PLB-1的表達(dá)量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P<0.05。[結(jié)論]1、白假絲酵母菌仍是妊娠與非妊娠VVC及RVVC的主要致病菌種;2、氟康唑在三種抗真菌藥物中敏感性最高,敏感率在95%以上,可作為臨床治療的首選;3、25SrDNA基因編碼區(qū)可轉(zhuǎn)座I型內(nèi)含子的存在可能會影響陰道致病白假絲酵母菌對氟康唑、兩性霉素B及伊曲康唑的藥物敏感性,并且其可能對白假絲酵母菌的細(xì)胞外磷脂酶活性有增強(qiáng)作用;而致病白假絲酵母菌的天冬氨酸蛋白酶活性可能與菌株對伊曲康唑的藥物敏感性有關(guān);4、外陰陰道假絲酵母菌病的復(fù)發(fā)可能與致病白假絲酵母菌的Sap-2及PLB-1表達(dá)量增加有關(guān)。 還原

關(guān)鍵詞：復(fù)發(fā)性外陰陰道假絲酵母菌病; 基因分型; 藥物敏感性; 侵襲力; 分泌型天冬氨酸蛋白酶; 磷脂酶;

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