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目的:通過建立大鼠頸部腎移植模型來探討前列地爾持續(xù)低溫灌對大鼠移植腎熱缺血的保護性作用及相關(guān)機制,為前列地爾應用于臨床器官保存提供實驗依據(jù)。方法:選用近交系SD大鼠作為實驗研究對象,均為雄鼠,體重均為250-300g。采用完全隨機設(shè)計(隨機數(shù)字表法)將80只供體SD大鼠均分為對照組(A組)、實驗組(B組)2組,每組又分為術(shù)后1天、3天、5天和7天組等4個時間點進行檢測。兩組大鼠腎臟均熱缺血45min后持續(xù)4℃環(huán)境下灌注2h。灌注后,將供腎進行頸部腎移植手術(shù)并摘除受體雙腎。對照組:灌注液為高滲枸櫞酸鹽腺嘌呤溶液(HC-A)腎保存液+生理鹽水;實驗組:灌注液為高滲枸櫞酸鹽腺嘌呤溶液(HC-A)腎保存液+Lipo-PGE1。術(shù)后清潔級環(huán)境飼養(yǎng),于術(shù)后1天、3天、5天、7天采集頸靜脈血樣采用全自動生化分析儀檢測血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血清肌酐(serum creatmne,SCr)含量,采血后處死并取腎臟組織。采用生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)測定腎臟組織8-羥基脫氧鳥苷(8-hydroxy—2 deoxyguanosine,8-OHDG)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,免疫印跡法(western blotting,WB)檢測腎組織細胞凋亡標志酶caspase-3和低氧誘導因子1α(hypoxia inducible factor-lalpha,HIF-1α)表達情況;腎組織HE染色后觀察病理形態(tài)學。得到數(shù)據(jù)后使用SPSS18.0軟件對數(shù)據(jù)進行處理與分析。結(jié)果:1、腎功能兩組大鼠血清BUN濃度均呈上升趨勢,且兩組術(shù)后1、3、5天均進行組內(nèi)對比,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),術(shù)后5、7天對比均無顯著差異(P>0.05);術(shù)后各時間點進行組間比較,B組顯著低于A組(P<0.05)。兩組大鼠血清Cr濃度隨時間延長均呈顯著上升趨勢(P<0.05),均于術(shù)后7天達到高峰;兩組同時間點進行組間比較,B組均顯著低于A組(P<0.05)。2、腎組織形態(tài)學改變A、B組光鏡觀察病理形態(tài)學上差異較顯著。A組腎小球體增大,腎小球毛細血管輪廓模糊,腎小囊腔變小,較多腎小管上皮水腫變性或壞死,胞漿內(nèi)紅染的顆粒數(shù)目明顯增多,且顆粒增粗,部分管腔內(nèi)可見管型。B組腎小球體稍增大,腎小球毛細血管輪廓較清晰,腎小囊腔減小不明顯,小部分腎小管上皮細胞水腫變性或壞死,胞漿內(nèi)紅染的顆粒數(shù)目有所增多,但顆粒未見增粗,少量管腔內(nèi)可見紅細胞管型,腎小管上皮細胞無破碎、壞死現(xiàn)象。3、腎組織8-OHDG和MDA的含量兩組8-OHDG含量在再灌注后隨著時間延長均呈逐步上升的趨勢;兩組術(shù)后同時間點組內(nèi)比較,B組于術(shù)后各相鄰時間點的8-OHDG含量并無顯著性變化(P>0.05);而A組于術(shù)后第1天和第3天、第3天和第5天的8-OHDG含量變化顯著(P<0.05)。兩組于術(shù)后第1、3、5、7天進行組間比較,B組的8-OHDG含量均較A組有顯著性下降(P<0.05)。兩組MDA含量在術(shù)后1、3、5天均呈逐步上升的趨勢,且均于術(shù)后第5天達到頂峰,隨后均有不同程度下降。B組的MDA含量在術(shù)后第1、3、5、7天均顯著低于A組(P<0.05);組內(nèi)比較,B組的MDA含量在術(shù)后第7天較第5天時顯著下降(P<0.05),而A組的MDA含量在術(shù)后第7天較第5天時比較無顯著性差異(P>0.05)。4、腎組織caspase-3與HIF-1α蛋白相對表達量兩組術(shù)后1、3、5、7天進行組間比較,B組的caspase-3表達水平均顯著低于A組(P<0.05);A組的caspase-3表達水平術(shù)后呈逐漸上升的趨勢,并于術(shù)后第5天達到峰值,隨后第7天出現(xiàn)緩慢下降,術(shù)后1、3、5天進行組內(nèi)比較均有顯著性差異(P<0.05),而第5天與第7天比較差異不明顯(P>0.05)。B組的caspase-3表達水平于術(shù)后第3天達到最高值,隨后第5、7天均顯著性下降(P<0.05)。兩組術(shù)后HIF-1α表達水平隨時間延長,均呈下降趨勢,但兩組術(shù)后1、3、5、7天進行組間比較,B組的HIF-1α表達水平均顯著低于A組(P<0.05)。結(jié)論:1.含脂質(zhì)體前列地爾的HC-A腎保液可能是通過減輕氧自由基誘發(fā)的脂質(zhì)過氧化損傷及DNA氧化損傷,減輕腎小管上皮細胞的損傷及壞死,來提高熱缺血腎臟保存質(zhì)量,從而改善大鼠移植腎功能。2.氧化應激反應及腎小管上皮細胞凋亡在大鼠移植腎缺血再灌注損傷機制中起著重要作用。
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